국민의 더 안전하고 건강한 삶을 위한
건강기능식품 플랫폼

  • 통합검색
  • 인정현황
  • 내게맞는실험법
  • 기능지표성분분석법
  • top

체지방감소

동물실험법

제목 혈청 포도당 측정
구분 체지방감소 링크 주 바이오마커 및 생화학적 인자
실험배경
비만은 인슐린저항성(insulin resistance)로 인해 지방조직, 근육 등의 말초조직에서 인슐린에 의한 포도당 수송과 당대사가 원활히 이루어지지 않아, 정상인에 비하여 높은 혈당 수준을 나타낸다. 증가한 혈당을 저하시키기 위하여 췌장에서는 더욱 높은 농도의 인슐린을 분비하게 되고, 이는 췌장의 β-세포의 과부하로 인한 기능이상과 세포사멸로 이어져 당뇨(type 2 diabetes)를 유발시킬 수 있으며, 실제적으로 비만인의 경우 당뇨를 동반하고 있는 경우가 많다. 이러한 의미에서 혈청 내 포도당 수준을 관찰하는 것은 중요하다 할 수 있겠다.

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
그림 1. 비만, 인슐린 저항성과 당뇨 (Kahn et al., 2006)
 
실험재료
필요장비 및 소모품
분광광도계, 항온수조, 시험관(test tube), pipette, pipette tips, cuvette  
필요시약
분광광도계, 항온수조, 시험관(test tube), pipette, pipette tips, cuvette
 
세포주
 
실험방법
1. 효소비색법을 이용한 kit 시약을 사용하여 분석한다.
2. 증류수(blank), 중성지방 표준액, 혈청 시료를 준비한다.
3. 반응액을 3 ml을 첨가하고 잘 혼합한다.
4. 37℃에서 15분간 반응시킨다.
5. 500 nm에서 흡광도를 측정한다.
6. 표준액의 흡광도과 비교하여 glucose 함량을 계산한다.
계산법: (혈청 흡광도/표준시약 흡광도) X 400 
결과해석
흡광도가 높을수록 혈청 중 포도당 함량이 높은 것을 의미한다. 비만으로 인한 높은 포도당 함량은 당뇨, 심혈관질환 등의 위험요인이 될 수 있다.
참고문헌 1. Yoon SS, Mekalanos JJ, 2,3-Butanediol synthesis and the emergence of the Vibrio cholerae El Tor biotype, Infect. Immun., 74(12) p6547-6556, 2006
2. Schmidt C, Höcherl K, Bucher M, Regulation of renal glucose transporters during severe inflammation, Am. J. Physiol. Renal. Physiol., 292(2) pF804-F811, 2007
3. Kahn SE, Hull RL, Utzschneider KM, Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes., Nature, 444(7121) p840-846, 2006
목록보기
제목 혈청 포도당 측정 링크 주 바이오마커 및 생화학적 인자
실험재료
필요장비 및 소모품
분광광도계(Jasco), 항온수조(BÜCHI), 시험관(Falcon), pipette(Eppendorf), pipette tips(Eppendorf), cuvette(Agilent Technologies)
 
필요시약
지엘자임(신양화학약품)  
실험방법
혈청중의 포도당은 글루코스산화효소의 작용에 의해 Gluconic acid와 과산화수소를 생성한다. 4-아미노안티피린과 페놀은 과산화수소에 대한 과산화효소의 작용에 의해 산화축합되어 적색키논을 생성한다. 이 키논형 색소를 측정하여 포도당 농도를 구한다.
                                   GOD
Glucose + H2O + O2 ---------------> H2O2 + D-Gluconic acid
                                                     POD
H2O2 + 4-Aminoantipyrine + Phenol ------------> Quinone + H2O
 
1. 혈청 시료를 준비한다. 혈청시료가 냉동상태이면 냉장온도에서 두어 녹여 놓는다.
간혹 혈청에 부유물이 생기기도 하므로 이 경우에는 centrifuge하여 상층액을 사용하도록 한다.
2. 항온수조를 37℃로 setting한다.
3. 라벨한 시험관에 혈청 20 μl씩 취한다.
4. 혼합한 효소반응액 3 ml를  각각의 시험관에 넣고 vortex한다.
5. 37℃ 항온수조에서 5분간 반응시킨다.
6. 시험관을 항온수조에서 꺼내어 반응을 종결시킨다.
7. 분광광도계를 이용하여 500 nm 파장에서 흡광도를 60분 이내로 측정한다.
Tips :
- Blank를 측정하여 흡광도 값을 0으로 맞춘다.
- 일반적으로 glucose 400 mg/dl의 흡광도는 0.900~1.200 정도이다.
- Kit는 효소를 함유하고 있기 때문에 반드시 냉장보관한다.
- 조제한 효소반응액은 2~8℃ 보존에서 3주간 사용할 수 있다.
- 실험 중 빠른 혈당의 측정이 필요한 경우에는 상용화된 glucometer(다양한 브랜드에서 상용화되어 있음. 예로는 OneTouch Ultra, Accu-Check 등이 있음)를 사용하여 빠르게 측정이 가능하다. 이 경우에는 꼬리 끝을 살짝 절단하여 한방울의 피를 낸 다음, 휴지로 첫 방울을 닦아내고 다시 부드럽게 꼬리를 터치하여 나온 한 방울로 측정하도록 한다. 꼬리를 세게 당길 경우에는 림프액이 같이 섞여 나올 수도 있기 때문에 짜내지 않도록 주의한다.
 
실험결과 예

결과해석
항비만 소재가 함유된 고지방식이를 공급받은 군의 혈청 포도당 수준이 고지방식이군에 비하여 낮아, 고지방식이에 의해 증가된 혈청 포도당 수준을 낮추는 효과가 있는 것으로 판단된다.
 
참고문헌
첨부파일
목록보기