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혈행개선

동물실험법

제목 Serotonin 농도 측정
구분 혈행개선 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험배경

세로토닌은 장크롬친화세포(enterochromaffin cell)와 뉴런 등에서 트립토판(tryptophan)으로부터 합성된다. 트립토판은 tryptophan-5-hydroxylase에 의해 가수분해 되어 5-hydroxytryptophan이 되고, aromatic L-amino acid decarboxylase에 의해 탈카르복실화(decarboxylation)되어 세로토닌으로 변환된다. 세로토닌은 간, 뇌, 혈관내피세포 등의 조직으로 유입되어 모노아민산화효소 (monoamine oxidase, MAO)에 의해 5-HIAA(5-hydroxyindoleacetaldehyde)로 대사되고 aldehyde dehydrogenase, alcohol dehydrogenase, aldehyde reductase 등에 의하여 5-hydroxyindoleacetic acid나 5-hydroxytryptophan이 되어 소변으 로 배설된다. 혈액에서는 대부분 혈소판에 저장되어 있다가 혈소판이 활성화되면 유리되어 다시 혈소판의 5-HT receptor에 작용하여 응집을 촉진시키기 때문에 혈소판 활성화의 바이오마커로 사용되기도 한다.

실험재료
필요장비 및 소모품

ELISA reader, 원심분리기, pipette, pipette tip, plastic tube, 10ml 주사기

 
필요시약

Biotin-antibody, Horseradish peroxidase, TMB, H2SO4

 
세포주

Platelet

 
실험방법

1. Rat에 효능을 보고자 하는 후보 소재를 투여한다.

2. 4℃에서 1000g로 15분간 centrifuge하여 plasma를 얻는다.

3. Plasma에 biotin-antibody 100ul를 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

4. Horseradish peroxidase 100ul를 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

5. TMB(tetramethylbenzimide) 100ul를 넣고 반응물의 색 변화를 관찰한다.

6. 색에 변화가 충분히 생기면 H2SO4를 넣어서 반응을 멈춘다.

7. 450nm에서 흡광도를 측정한다.

결과해석

Serotonin은 혈소판 응집을 촉진하므로, serotonin의 분비를 억제하는 소재는 혈행 개선 효능이 있을 것으로 생각할 수 있다.

참고문헌 1. Ryu R, Kim HJ, Moon B, Jung UJ, Lee MK, Lee DG, Ryoo Z, Park YB, Choi MS, Ethanol Extract of Persimmon Tree Leaves Improves Blood Circulation and Lipid Metabolism in Rats Fed a High-Fat Diet, J Med Food. 18(7):715-23, 2015
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제목 Serotonin 농도 측정 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험재료
필요장비 및 소모품

ELISA reader, 원심분리기(Sorvall fresco), pipette(Thermo scientific), pipette tip(QSP), plastic tube(BD flacon)

 
필요시약

Biotin-antibody(MyBioSource), Horseradish peroxidase(MyBioSource), TMB(MyBioSource), H2SO4(Sigma)

 
실험방법

1. Rat에 효능을 보고자 하는 후보 소재를 투여한다.

2. 4℃에서 1000g로 15분간 centrifuge하여 plasma를 얻는다.

3. Plasma에 biotin-antibody 100ul를 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

4. Horseradish peroxidase 100ul를 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시킨다.

5. TMB(tetramethylbenzimide) 100ul를 넣고 반응물의 색 변화를 관찰한다.

6. 색에 변화가 충분히 생기면 H2SO4를 넣어서 반응을 멈춘다.

7. 450nm에서 흡광도를 측정한다.

실험결과 예

 

출처: Ryu R et al., 2015 

결과해석

PL을 투여하여도 세로토닌 분비에는 별 차이가 없었기 때문에 PL은 serotonin을 통해서 혈행 개선 기능을 나타내지는 못 한다고 판단된다.

참고문헌 1. Ryu R, Kim HJ, Moon B, Jung UJ, Lee MK, Lee DG, Ryoo Z, Park YB, Choi MS, Ethanol Extract of Persimmon Tree Leaves Improves Blood Circulation and Lipid Metabolism in Rats Fed a High-Fat Diet, J Med Food. 18(7):715-23, 2015
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