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혈행개선

동물실험법

제목 Prostaglandin I2 농도 측정
구분 혈행개선 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험배경

PGI2은 프로스타사이클린(prostacyclin)이라고도 불리며, TXA2와 길항작용을 함으로써 혈소판의 활성화 및 플라그 형성을 방해한다. 또한 혈관 이완에도 관여하는 것으로 알려져 있다. 혈액이나 소변 중 PGI2 농도 및 그 대사물의 수준을 측정할 수 있다.

실험재료
필요장비 및 소모품

주사기, 원심분리기, pipette, pipette tip, platic tube

 
필요시약

Heparin, EIA kits

 
세포주

Rat

 
실험방법

1. 동물로부터 혈액을 채취한다.

2. 채취한 혈액을 4000rpm으로 5분간 centrifuge한다.

3. PGI2는 안정한 대사체인 6-keto-PGF1a(prostaglandin F1a)를 측정하여 계산하며, Cayman에서 제공하는 kit에서 지시하는 방법에 의거하여 수행한다. 자세한 방법은 다음과 같다.

1) 96 well plate에 6-keto-PGF1a 항체를 50ul씩 넣고 냉장고에 O/N으로 둔다.

2) 6-keto-PGF1a 항체를 털어낸 후 plasma를 각각 100ul 씩 넣어 상온에서 2시간 동안 반응시킨다.

3) Biotin-conjugated 6-keto-PGF1a 항체를 100ul 씩 넣고 상온에서 2시간 동안 반응시킨다.

4) Avidin-conjugated horseradish peroxidase를 100ul 씩 넣고 상온에서 30분간 반응시킨다.

5) TMB를 100ul 씩 넣고 상온에서 반응시키면서 색의 변화를 관찰한다. 

6) Standard curve의 색이 gradient하게 바뀌면 stop solution(H2SO4.을 50ul 씩 넣어 반응을 종결시킨다. 

7) ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정한다.

결과해석

PGI2는 혈소판 응집을 저해하므로, PGI2의 분비를 촉진하는 소재는 혈행 개선 효능이 있을 것으로 생각할 수 있다. TXA2/PGI2의 비율로써 계산되는 경우 비율이 낮을수록 혈행 개선 효능이 있을 것으로 생각할 수 있다.

참고문헌 1. Yu C, Qi D, Lian W, Li QZ, Li HJ, Fan HY, Effects of danshensu on platelet aggregation and thrombosis: in vivo arteriovenous shunt and venous thrombosis models in rats, PLoS One. 9(11):e110124, 2014
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제목 Prostaglandin I2 농도 측정 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험재료
필요장비 및 소모품

주사기(BD falcon), 원심분리기(Sorvall fresco), pipette(Thermo scientific), pipette tip(QSP), plastic tube(BD flacon)

 
필요시약

Heparin(Jiangsu Wanbang Biochemical Medicine), EIA kits(Tianjin Jiuding Engineering of Medicine and Biology)

 
실험방법

1. 동물로부터 혈액을 채취한다.

2. 채취한 혈액을 4000rpm으로 5분간 centrifuge한다.

3. PGI2는 안정한 대사체인 6-keto-PGF1a(prostaglandin F1a)를 측정하여 계산하며, Cayman에서 제공하는 kit에서 지시하는 방법에 의거하여 수행한다. 자세한 방법은 다음과 같다.

1) 96 well plate에 6-keto-PGF1a 항체를 50ul씩 넣고 냉장고에 O/N으로 둔다.

2) 6-keto-PGF1a 항체를 털어낸 후 plasma를 각각 100ul 씩 넣어 상온에서 2시간 동안 반응시킨다.

3) Biotin-conjugated 6-keto-PGF1a 항체를 100ul 씩 넣고 상온에서 2시간 동안 반응시킨다.

4) Avidin-conjugated horseradish peroxidase를 100ul 씩 넣고 상온에서 30분간 반응시킨다.

5) TMB를 100ul 씩 넣고 상온에서 반응시키면서 색의 변화를 관찰한다. 

6) Standard curve의 색이 gradient하게 바뀌면 stop solution(H2SO4.을 50ul 씩 넣어 반응을 종결시킨다. 

7) ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정한다.

실험결과 예


출처: Yu C et al., 2014 

결과해석

Danshensu에 의해 PGI2의 안정한 대사체인 6-keto-PGF1a의 농도가 증가하였으므로, Danshensu는 혈행 개선 효능을 보일 것으로 생각된다.

참고문헌 1. Yu C, Qi D, Lian W, Li QZ, Li HJ, Fan HY, Effects of danshensu on platelet aggregation and thrombosis: in vivo arteriovenous shunt and venous thrombosis models in rats, PLoS One. 9(11):e110124, 2014
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