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혈행개선

동물실험법

제목 Prothrombin time 측정
구분 혈행개선 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험배경

혈액응고는 여러 가지 응고 인자들이 연속적으로 활성화되어 마지막으로 피브리노겐(fibrinogen)을 피브린(fibrin)으로 변화시킴으로써 이루어진다. 그 중 외인성 경로(extrinsic pathway)는 손상을 입은 혈관의 혈액 중에 조직액이 혼입되어 작동하는 응고 구조이며 혈관벽이나 주위 조직의 손상으로 시작된다.

실험재료
필요장비 및 소모품

혈액 응고 측정기, 10ml 주사기, 자석젓개, 가온교반기, 원심분리기

 
필요시약

시트르산 나트륨, Hemoliance RecombiPlasTin with HemolianceRecombiPlasTin Diluent (Instrumentation Laboratory)

 
세포주

Rat, mouse

 
실험방법

1. 채혈하기 전 항응고제, 3.8% 구연산나트륨(sodium citrate)를 만든다.

2. 1.에서 만든 항응고제를 주사기 내로 흡입하여 주사기 내벽을 둘러준다. 이 때의 항응고제의 양은 쥐의 혈액의 양을 고려하여(항응고제 : 혈액 = 1 : 9.결정한다. 주사기 내에 기포가 생기지 않게 주의한다.

3. 쥐의 혈액을 체취한다.

4. 체취한 혈액을 원심분리기 2500rpm에서 15분간 원심분리하며 상등액만을 취한다.

5. 냉장보관하고 있던 프로트롬빈 측정 시약은 원심분리하는 동안에 상온에서 최소 15분 이상이 되도록 방치한다. 또한 이 때 혈액 응고 측정기를 미리 켜두어 37℃가 되도록 한다.

6. 프로트롬빈 RecombiPlasTin과 희석액은 상온에서 최소 15분 이상 되도록 방치 후 희석액에서 정확히 5ml을 취하여 RecombiPlsTin에 넣고 흔들어 섞지 않고 위 아래로만 뒤집기를 반복하여 섞는다.

7. 프로트롬빈 측정 시약은 1.5ml 튜브(epen tube)에 옮겨 담고 가온교반기를 이용하여 37℃에서 5분 정도 예열한다.

8. 혈장 100㎕를 취하여 혈액 응고 측정기 위의 컵에서 1분간 배양한다.

9. 정확히 1분이 되면 미리 예열시켜 놓았던 프로트롬빈 측정 시약 200㎕를 급속히 가하고 혈액 응고 측정기 위의 스톱워치를 눌러서 멈출 때까지의 시간을 측정한다.

10. 모든 과정은 3회 반복 실시하여 평균을 낸다.

결과해석

PT가 길수록 혈전이 늦게 생기는 것이므로 혈행이 개선되는 것으로 판단한다.

참고문헌 1. Jin YR, Yu JY, Lee JJ, You SH, Chung JH, Noh JY, Im JH, Han XH, Kim TJ, Shin KS, Wee JJ, Yun YP, Antithrombotic and Antiplatelet Activities of Korean Red Ginseng Extract, Basic Clin Pharmacol Toxicol. 100(3):170-5, 2007
2. Yun YP, Do JH, Ko SR, Ryu SY, Kim JH, Song HC, Park YD, Ahn KS, Kim SH, Effects of Korean red ginseng and its mixed prescription on the high molecular weight dextran-induced blood stasis in rats and human platelet aggregation, J Ethnopharmacol. 77(2-3):259-64, 2001
3. Yang SA, Im NK, Lee IS, Effects of Methanolic Extract from Salvia miltiorrhiza Bunge on in vitro Antithrombotic and Antioxidative Activities, Korean J. Food SCI. Technol. 39(1):83-87, 2007
4. Noh KH, Park CM, Jang JH, Shin JH, Cho MK, Kim JO, Song YS, Effects of Nattokinase fibrinol supplementation on Fibrinolysis and Atherogenesis, Journal of Life Science. 19(-):289-298, 2009
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제목 Prothrombin time 측정 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험재료
필요장비 및 소모품

혈액 응고 측정기, 10ml 주사기(BD falcon), 자석젓개, 가온교반기, 원심분리기(Sorvall fresco)

 
필요시약

시트르산 나트륨(Sigma), Hemoliance RecombiPlasTin with HemolianceRecombiPlasTin Diluent (Instrumentation Laboratory)

 
실험방법

1. 채혈하기 전 항응고제, 3.8% 구연산나트륨(sodium citrate)를 만든다.

2. 1.에서 만든 항응고제를 주사기 내로 흡입하여 주사기 내벽을 둘러준다. 이 때의 항응고제의 양은 쥐의 혈액의 양을 고려하여(항응고제 : 혈액 = 1 : 9.결정한다. 주사기 내에 기포가 생기지 않게 주의한다.

3. 쥐의 혈액을 체취한다.

4. 체취한 혈액을 원심분리기 2500rpm에서 15분간 원심분리하며 상등액만을 취한다.

5. 냉장보관하고 있던 프로트롬빈 측정 시약은 원심분리하는 동안에 상온에서 최소 15분 이상이 되도록 방치한다. 또한 이 때 혈액 응고 측정기를 미리 켜두어 37℃가 되도록 한다.

6. 프로트롬빈 RecombiPlasTin과 희석액은 상온에서 최소 15분 이상 되도록 방치 후 희석액에서 정확히 5ml을 취하여 RecombiPlsTin에 넣고 흔들어 섞지 않고 위 아래로만 뒤집기를 반복하여 섞는다.

7. 프로트롬빈 측정 시약은 1.5ml 튜브(epen tube)에 옮겨 담고 가온교반기를 이용하여 37℃에서 5분 정도 예열한다.

8. 혈장 100㎕를 취하여 혈액 응고 측정기 위의 컵에서 1분간 배양한다.

9. 정확히 1분이 되면 미리 예열시켜 놓았던 프로트롬빈 측정 시약 200㎕를 급속히 가하고 혈액 응고 측정기 위의 스톱워치를 눌러서 멈출 때까지의 시간을 측정한다.

10. 모든 과정은 3회 반복 실시하여 평균을 낸다.

실험결과 예


출처: Jin YR et al., 2007 

결과해석

홍삼 추출물을 처리했을 때 PT가 유의미하게 변하지 않았으므로, 홍삼 추출물은 혈액응고시스템에는 영향을 주지 않음을 알 수 있다.

참고문헌 1. Jin YR, Yu JY, Lee JJ, You SH, Chung JH, Noh JY, Im JH, Han XH, Kim TJ, Shin KS, Wee JJ, Yun YP, Antithrombotic and Antiplatelet Activities of Korean Red Ginseng Extract, Basic Clin Pharmacol Toxicol. 100(3):170-5,2 2007
2. Yun YP, Do JH, Ko SR, Ryu SY, Kim JH, Song HC, Park YD, Ahn KS, Kim SH, Effects of Korean red ginseng and its mixed prescription on the high molecular weight dextran-induced blood stasis in rats and human platelet aggregation, J Ethnopharmacol. 77(2-3):259-64, 2001
3. Yang SA, Im NK, Lee IS, Effects of Methanolic Extract from Salvia miltiorrhiza Bunge on in vitro Antithrombotic and Antioxidative Activities, Korean J. Food SCI. Technol. 39(1):83-87, 2007
4. Noh KH, Park CM, Jang JH, Shin JH, Cho MK, Kim JO, Song YS, Effects of Nattokinase fibrinol supplementation on Fibrinolysis and Atherogenesis, Journal of Life Science. 19(-):289-298, 2009
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