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혈행개선
동물실험법
제목 | 조직인자(Tissue factor) 유전자 발현 분석 | ||
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구분 | 혈행개선 | 링크 | 혈소판 활성, 혈액응고 |
실험배경 | 조직인자(Tissue factor)는 내피하조직(subendothelial tissue)과 백혈구에 존재하는 단백질로 외인성 혈액응고반응 초기 단계에 관여하는 응고인자 VIIa와 결합하여 혈액응고반응을 활성화시킨다. |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. RNA를 Trizol reagent(또는 RNA extract kit)을 이용하여 추출하고, 순도 및 함량을 확인한다. [SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조 2. 샘플별로 추출한 RNA 함량을 동일하게 맞춘다. 3. 추출한 RNA, oligo(DT) primer, dNTP, reverse transcriptase, RT buffer. RNase inhibitor, RNase free water를 이용하여 cDNA를 합성한다. [SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조 4. PCR 튜브에 합성한 cDNA, Tissue factor(Mm004438853_m1. forward primer, Tissue factor(Mm004438853_m1. reverse primer, SYBR Green PCR Master mix(또는 Taqman)를 첨가한다. 5. 제작된 primer에 맞도록 반응온도와 cycle을 조절하여 quantitative RT-PCR을 실시한다 6. △△CT방법을 사용하여 P-selectin 유전자의 발현량을 정량한다. 이때 endogenous control 유전자로 normalization한다. [SOP A13112 Quantitative Real Time PCR] 참조 |
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결과해석 | Tissue factor는 혈액응고반응을 활성화시키므로 tissue factor를 감소시키는 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있을 것으로 생각할 수 있다. |
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참고문헌 | 1. Sanjana D, Katina MW, Lorie L, Erland A, Teodoro B, Steven RL, Enhanced susceptibility to arterial thrombosis in a murine model of hyperhomocysteinemia, Blood. 108(7):2237-43, 2006 |
제목 | 조직인자(Tissue factor) 유전자 발현 분석 | 링크 | 혈소판 활성, 혈액응고 |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. RNA를 Trizol reagent(또는 RNA extract kit)을 이용하여 추출하고, 순도 및 함량을 확인한다. [SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조 2. 샘플별로 추출한 RNA 함량을 동일하게 맞춘다. 3. 추출한 RNA, oligo(DT) primer, dNTP, reverse transcriptase, RT buffer. RNase inhibitor, RNase free water를 이용하여 cDNA를 합성한다. [SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조 4. PCR 튜브에 합성한 cDNA, Tissue factor(Mm004438853_m1. forward primer, Tissue factor(Mm004438853_m1. reverse primer, SYBR Green PCR Master mix(또는 Taqman)를 첨가한다. 5. 제작된 primer에 맞도록 반응온도와 cycle을 조절하여 quantitative RT-PCR을 실시한다 6. △△CT방법을 사용하여 P-selectin 유전자의 발현량을 정량한다. 이때 endogenous control 유전자로 normalization한다. [SOP A13112 Quantitative Real Time PCR] 참조 |
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실험결과 예 |
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결과해석 | HM/LF diet에 의해 tissue factor mRNA 발현에는 유의적인 영향이 없었다. |
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참고문헌 | 1. Sanjana D, Katina MW, Lorie L, Erland A, Teodoro B, Steven RL, Enhanced susceptibility to arterial thrombosis in a murine model of hyperhomocysteinemia, Blood. 108(7):2237-43, 2006 | ||
첨부파일 |
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