조직인자(Tissue factor)는 내피하조직(subendothelial tissue)과 백혈구에 존재하는 단백질로 외인성 혈액응고반응 초기 단계에 관여하는 응고인자 VIIa와 결합하여 혈액응고반응을 활성화시킨다. 

필요장비 및 소모품

7700 sequence detection system

 

필요시약

TRIzol, reverse transcriptase, tissue factor primer

 

세포주

Mouse

 

1. RNA를 Trizol reagent(또는 RNA extract kit)을 이용하여 추출하고, 순도 및 함량을 확인한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

2. 샘플별로 추출한 RNA 함량을 동일하게 맞춘다. 

3. 추출한 RNA, oligo(DT) primer, dNTP, reverse transcriptase, RT buffer. RNase inhibitor, RNase free water를 이용하여 cDNA를 합성한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

4. PCR 튜브에 합성한 cDNA, Tissue factor(Mm004438853_m1. forward primer, 

Tissue factor(Mm004438853_m1. reverse primer, SYBR Green PCR Master mix(또는 Taqman)를 첨가한다.

5. 제작된 primer에 맞도록 반응온도와 cycle을 조절하여 quantitative RT-PCR을 실시한다 

6. △△CT방법을 사용하여 P-selectin 유전자의 발현량을 정량한다. 이때 endogenous control 유전자로 normalization한다.

[SOP A13112 Quantitative Real Time PCR] 참조

Tissue factor는 혈액응고반응을 활성화시키므로 tissue factor를 감소시키는 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있을 것으로 생각할 수 있다.