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혈행개선

동물실험법

제목 조직인자(Tissue factor) 유전자 발현 분석
구분 혈행개선 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험배경

조직인자(Tissue factor)는 내피하조직(subendothelial tissue)과 백혈구에 존재하는 단백질로 외인성 혈액응고반응 초기 단계에 관여하는 응고인자 VIIa와 결합하여 혈액응고반응을 활성화시킨다. 

실험재료
필요장비 및 소모품

7700 sequence detection system

 
필요시약

TRIzol, reverse transcriptase, tissue factor primer

 
세포주

Mouse

 
실험방법

1. RNA를 Trizol reagent(또는 RNA extract kit)을 이용하여 추출하고, 순도 및 함량을 확인한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

2. 샘플별로 추출한 RNA 함량을 동일하게 맞춘다. 

3. 추출한 RNA, oligo(DT) primer, dNTP, reverse transcriptase, RT buffer. RNase inhibitor, RNase free water를 이용하여 cDNA를 합성한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

4. PCR 튜브에 합성한 cDNA, Tissue factor(Mm004438853_m1. forward primer, 

Tissue factor(Mm004438853_m1. reverse primer, SYBR Green PCR Master mix(또는 Taqman)를 첨가한다.

5. 제작된 primer에 맞도록 반응온도와 cycle을 조절하여 quantitative RT-PCR을 실시한다 

6. △△CT방법을 사용하여 P-selectin 유전자의 발현량을 정량한다. 이때 endogenous control 유전자로 normalization한다.

[SOP A13112 Quantitative Real Time PCR] 참조

결과해석

Tissue factor는 혈액응고반응을 활성화시키므로 tissue factor를 감소시키는 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있을 것으로 생각할 수 있다.

참고문헌 1. Sanjana D, Katina MW, Lorie L, Erland A, Teodoro B, Steven RL, Enhanced susceptibility to arterial thrombosis in a murine model of hyperhomocysteinemia, Blood. 108(7):2237-43, 2006
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제목 조직인자(Tissue factor) 유전자 발현 분석 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험재료
필요장비 및 소모품

7700 sequence detection system (Applied Biosystems)

 
필요시약

TRIzol(Invitrogen), reverse transcriptase(Applied Biosystems), tissue factor primer(Applied Biosystems)

 
실험방법

1. RNA를 Trizol reagent(또는 RNA extract kit)을 이용하여 추출하고, 순도 및 함량을 확인한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

2. 샘플별로 추출한 RNA 함량을 동일하게 맞춘다. 

3. 추출한 RNA, oligo(DT) primer, dNTP, reverse transcriptase, RT buffer. RNase inhibitor, RNase free water를 이용하여 cDNA를 합성한다.

[SOP A13111. RNA 추출 및 cDNA 합성] 참조

4. PCR 튜브에 합성한 cDNA, Tissue factor(Mm004438853_m1. forward primer, 

Tissue factor(Mm004438853_m1. reverse primer, SYBR Green PCR Master mix(또는 Taqman)를 첨가한다.

5. 제작된 primer에 맞도록 반응온도와 cycle을 조절하여 quantitative RT-PCR을 실시한다 

6. △△CT방법을 사용하여 P-selectin 유전자의 발현량을 정량한다. 이때 endogenous control 유전자로 normalization한다.

[SOP A13112 Quantitative Real Time PCR] 참조

실험결과 예


출처: Sanjana D et al., 2006 

결과해석

HM/LF diet에 의해 tissue factor mRNA 발현에는 유의적인 영향이 없었다. 

참고문헌 1. Sanjana D, Katina MW, Lorie L, Erland A, Teodoro B, Steven RL, Enhanced susceptibility to arterial thrombosis in a murine model of hyperhomocysteinemia, Blood. 108(7):2237-43, 2006
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