국민의 더 안전하고 건강한 삶을 위한
건강기능식품 플랫폼

  • 통합검색
  • 인정현황
  • 내게맞는실험법
  • 기능지표성분분석법
  • top

혈행개선

동물실험법

제목 Antithrombin 농도 측정
구분 혈행개선 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험배경

항트롬빈은 간에서 생성되는 당단백질로, 트롬빈의 작용을 억제할 뿐만 아니라 혈액 응고 과정에 관여하는 효소들을 불활성화 시키는 작은 단백질 분자이다.

실험재료
필요장비 및 소모품

주사기, pipette, pipette tip, plastic tube, 원심분리기, ELISA reader

 
필요시약

Polymer solution, heparin, thrombin,  thrombin-specific chromogenic substrate

 
세포주

Mouse

 
실험방법

1. 효능을 보고자 하는 후보 소재를 동물에 투여한다.

2. 4시간 후 혈액을 채취하여 platelet poor plasma(PPP)를 얻는다.

3. 2.에서 얻은 PPP를 1:18(v/v) 비율로 PBS에 희석한다.

4. 3.에서 희석한 PPP 150ul와 polymer solution 150ug, heparin 15ug을 37℃에서 2분간 반응시킨다.

5. 4.의 반응물에 150ul의 11U/ml thrombin을 첨가하고 반응시킨다. 

6. Chromogenic substrate 150ul를 넣고 1분마다 405nm에서 흡광도를 측정한다.

결과해석

항트롬빈은 혈액 응고에 관여하는 인자들을 불활성화시키므로 항트롬빈을 증가시키는 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있는 것으로 판단할 수 있다.

참고문헌 1. Said C, Emmanuel P, Denis B, Jose C, Jean-Pierre C, Effects on coagulation of a synthetic heparan mimetic given intraperitoneally or orally, J Biomed Mater Res A. 83(4):1024-31, 2007
목록보기
제목 Antithrombin 농도 측정 링크 혈소판 활성, 혈액응고
실험재료
필요장비 및 소모품

주사기(BD falcon), pipette(Thermo scientific), pipette tip(QSP), plastic tube(BD falcon), 원심분리기(Sorvall fresco), ELISA reader

 
필요시약

Polymer solution, heparin(Sigma), thrombin(Diagnostica Stago), thrombin-specific chromogenic substrate(Diagnostica Stago)

 
실험방법

1. 효능을 보고자 하는 후보 소재를 동물에 투여한다.

2. 4시간 후 혈액을 채취하여 platelet poor plasma(PPP)를 얻는다.

3. 2.에서 얻은 PPP를 1:18(v/v) 비율로 PBS에 희석한다.

4. 3.에서 희석한 PPP 150ul와 polymer solution 150ug, heparin 15ug을 37℃에서 2분간 반응시킨다.

5. 4.의 반응물에 150ul의 11U/ml thrombin을 첨가하고 반응시킨다. 

6. Chromogenic substrate 150ul를 넣고 1분마다 405nm에서 흡광도를 측정한다.

실험결과 예


출처: Said C et al., 2007 

결과해석

Inhibited thrombin이 증가한 것은 항트롬빈 활성이 높아졌기 때문으로 볼 수 있다. 

참고문헌 1. Said C, Emmanuel P, Denis B, Jose C, Jean-Pierre C, Effects on coagulation of a synthetic heparan mimetic given intraperitoneally or orally, J Biomed Mater Res A. 83(4):1024-31, 2007
첨부파일
목록보기