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혈행개선
동물실험법
제목 | Fibrinogen 단백질 발현 측정 | ||
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구분 | 혈행개선 | 링크 | 섬유소(원) 용해 |
실험배경 | 수용성 섬유소원은 간에서 합성되어 혈액 응괴 형성을 돕는 당단백질로 혈중에 가장 풍부하게 존재하는 혈액 응고 인자이며, 트롬빈에 의하여 불용성 섬유소로 전환된다. |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. 동물 조직으로부터 단백질을 추출한다. 2. BCA protein assay reagent로 단백질 농도를 측정한다. 3. 단백질 시료를 5X SDS-PAGE sample buffer와 혼합한다. 4. 100OC로 5분간 끓인다. 5. 0.12%(w/v) fibrinogen과 thrombin(1U/ml)이 함유된 12% polyacrylamide gel에 loading한다. 6. Loading이 끝난 후 2.5% Triton X-100 solution으로 gel을 washing한다. 7. Gel을 zymogram reaction buffer에 넣고 37℃에서 O/N으로 반응시킨다. 8. Gel을 coomassie Brilliant Blue R-250으로 staining한다. |
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결과해석 | 이 방법의 원리는 gel에 함유된 fibrinogen이 분해되는 것을 검출하는 원리이다. Coomassie Brilliant Blue로 염색된 것이 적을수록 fibrinogen이 적어지는 것을 볼 수 있으며, fibrinogen을 감소시키는 물질은 혈행 개선 기능성이 있는 것으로 볼 수 있다. |
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참고문헌 | 1. Kang SR, Choi JH, Kim DW, Park SE, Sapkota K, Kim S, Kim SJ, A bifunctional protease from green alga Ulva pertusa with anticoagulant properties: partial purification and characterization, Journal of Applied Phycology. 28(1):599-607, 2016 |
제목 | Fibrinogen 단백질 발현 측정 | 링크 | 섬유소(원) 용해 |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. 동물 조직으로부터 단백질을 추출한다. 2. BCA protein assay reagent로 단백질 농도를 측정한다. 3. 단백질 시료를 5X SDS-PAGE sample buffer와 혼합한다. Tips: - Sample buffer 조성 : 1M urea, 4% SDS, and 4% β-mercaptoethanol 4. 100℃로 5분간 끓인다. 5. 0.12%(w/v) fibrinogen과 thrombin(1U/ml)이 함유된 12% polyacrylamide gel에 loading한다. 6. Loading이 끝난 후 2.5% Triton X-100 solution으로 gel을 washing한다. 7. Gel을 zymogram reaction buffer에 넣고 37℃에서 O/N으로 반응시킨다. Tips: - Zymogram reaction buffer 조성 : 30 mM Tris (pH 7.4. containing 200 mM NaCl, 10 mM CaCl2, and 0.02 % NaN3 8. Gel을 coomassie Brilliant Blue R-250으로 staining한다. |
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실험결과 예 |
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결과해석 | 후보 소재 처리에 의해 시간이 갈수록 α chain과 β chain이 감소하고 있으므로, 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있다고 보여진다. |
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참고문헌 | 1. Kang SR, Choi JH, Kim DW, Park SE, Sapkota K, Kim S, Kim SJ, A bifunctional protease from green alga Ulva pertusa with anticoagulant properties: partial purification and characterization, Journal of Applied Phycology. 28(1):599-607, 2016 | ||
첨부파일 |
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