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혈행개선

동물실험법

제목 Plasminogen 농도 측정
구분 혈행개선 링크 섬유소(원) 용해
실험배경

플라스미노겐은 간에서 합성되는 당단백으로 다양한 활성인자에 의하여 플라스민(Plasmin)으로 전환된다. 플라스민은 혈액응고인자 V와 VIII, 섬유소원 전구물질, 섬유소원을 분해한다. 플라스미노겐 결핍 시 섬유소용해의 저하로 혈전 및 색전증이 나타날 수 있다.
실험재료
필요장비 및 소모품

10ml 주사기, 원심분리기, ELISA plate reader, pipette, pipette tip, 96 well plate

 
필요시약

Chromogenic substrate, rat tPA

 
세포주

Rat

 
실험방법

1. Rat에서 혈액을 채취한다.

2. 혈액을 10000g로 10분간 centrifuge하여 plasma를 분리한다.

3. Chromogenic substrate를 plasma와 반응시키고 색이 변하는 것을 관찰하면서 색이 어느 정도 바뀌면 405nm에서 흡광도를 측정한다.

4. Rat tPA를 plasma에 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시켜 plasminogen을 plasmin으로 전환시킨다.

5. Chromogenic substrate를 plasma와 반응시키고 색이 변하는 것을 관찰하면서 색이 어느 정도 바뀌면 405nm에서 흡광도를 측정한다.

6. 5.에서 구한 plasmin 양에서 3.에서 구한 plasmin 양을 뺀 것이 plasminogen 양이 된다.
결과해석

원래 있던 plasmin의 양을 측정하고, plasma 내의 plasminogen을 모두 plasmin으로 바꾼 후 plasmin의 양을 측정한 후 둘 사이의 값의 차이를 계산한 것이 plasminogen의 농도이다.
참고문헌 1. Wu X, Darlington DN, Cap AP, Procoagulant and fibrinolytic activity after polytrauma in rat, Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 310(4):R323-9, 2016
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제목 Plasminogen 농도 측정 링크 섬유소(원) 용해
실험재료
필요장비 및 소모품

10ml 주사기(BD falcon), 원심분리기(Sorvall fresco), ELISA plate reader, pipette(Thermo scientific), pipette tip(QSP), 96 well plate(BD falcon)

 
필요시약

Chromogenic substrate(Chromogenix), rat tPA(Abcam)

 
실험방법

1. Rat에서 혈액을 채취한다.

2. 혈액을 10000g로 10분간 centrifuge하여 plasma를 분리한다.

3. Chromogenic substrate를 plasma와 반응시키고 색이 변하는 것을 관찰하면서 색이 어느 정도 바뀌면 405nm에서 흡광도를 측정한다.

4. Rat tPA를 plasma에 넣고 37℃에서 1시간동안 반응시켜 plasminogen을 plasmin으로 전환시킨다.

5. Chromogenic substrate를 plasma와 반응시키고 색이 변하는 것을 관찰하면서 색이 어느 정도 바뀌면 405nm에서 흡광도를 측정한다.

6. 5.에서 구한 plasmin 양에서 3.에서 구한 plasmin 양을 뺀 것이 plasminogen 양이 된다.
실험결과 예


출처: Wu X et al., 2016 
결과해석

후보물질 처리 후 시간이 경과함에 따라 plasminogen이 증가하는 것을 봐서 혈행이 개선되는 것으로 볼 수 있다.
참고문헌 1. Wu X, Darlington DN, Cap AP, Procoagulant and fibrinolytic activity after polytrauma in rat, Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 310(4):R323-9, 2016
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