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인지능력개선

동물실험법

제목 베타-아밀로이드 투여 인지능력 결손 모델
구분 인지능력향상 링크 동물모델
실험배경

알츠하이머 질환 원인 중 하나인 β-amyloid를 실험동물의 뇌 조직에 직접 주입하여 인지기능 손상을 유도한 동물모델로 기능성소재의 인지능력개선 효능평가를 위해 널리 사용되고 있다.

실험재료
필요장비 및 소모품

intracerebroventricular injection 장비, 미세주사기, 26 gage 주사바늘, 동물 수술용 blade, 포셉, 거즈

 
필요시약

β-amyloid(1-40) , PBS, isoflurane, 70% 에탄올, 식이

 
세포주

mouse, rat 등

 
실험방법

1. β-amyloid(1-40, Aβ) solution을 준비한다.

2. 실험동물을 마취시킨 후, 고정 틀에 고정시킨다.

3. 뇌조직에 좌표값에 맞춰서, 미세주사기를 이용하여 Aβ용액을 intracerebroventricular(icv) injection한다.

4. 일정기간이 지난 후, 행동실험과 작용기전 관련 바이오마커 분석을 통해 인지기능 손상을 확인하다. 

결과해석

Aβ투여군과 정상군 비교시, 행동실험(water maze, passive avoidance)이나 작용기전 관련 바이오마커의 유의적 변화를 통해 인지기능 손상을 판단할 수 있다.

참고문헌 1. Nitta A, Itoh A, Hasegawa T, Nabeshima T. beta-Amyloid protein-induced Alzheimer`s disease animal model. Neurosci Lett. 28;170(1):63-6, 1994
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제목 베타-아밀로이드 투여 인지능력 결손 모델 링크 동물모델
실험재료
필요장비 및 소모품

intracerebroventricular injection 장비, 미세주사기(성진메드), 26 gage 주사바늘(성진메드), 동물 수술용 blade(kent scientific), 포셉(kent scientific), 거즈(성진메드)

 
필요시약

β-amyloid(1-40)(sigma-aldrich), PBS(바이오세상), isoflurane(sigma-aldrich), 70% 에탄올(덕산과학)

 
실험방법

1. β-amyloid 응집

1) Aβ1-40를 0.1M PBS에 녹여 1 mg/ml 농도로 만든다.

2) Aβ1-40 solution을 37℃에서 4일간 incubation시켜서 Aβ을 응집시킨다.

Tips:

- 35% acetonitrile/0.1% trifluoacetic acid 용액을 사용할 수 있다. 

 

2. Intracerebroventricular injection

1) isoflurane (1 mg/ml or 2.5%)으로 마취시킨다.

2) 실험동물이 움직이지 않도록 고정 틀에 고정시킨다.

3) 실험동물의 두피를 절개하고, 두개골을 덮고 있는 연조직을 수술용 blade를 사용하여 긁어낸다.

4) 연령, 개체의 종에 따른 주입 조직의 좌표 값을 설정한다.

5) 26 gage 스테인리스스틸 주사바늘이 장착된 미세주사기를 이용하여 Aβ1-40 3㎕를 설정한 좌표 값에 맞도록 천천히 주입한다.

Tips:

- 주입부위: Frontal cortex 또는 hippocampus

- Aβ1-40 농도는 실험목적에 맞게 정한다.

6) 일정기간이 지난 후, 행동실험(water maze, passive avoidance 등) 및 작용기전 관련 바이오마커(acetylcholinesterase 등) 분석을 통해 인지기능 손상을 확인하다.  

실험결과 예


출처: Nitta A et al., 1994

결과해석

Aβ투여군의 latency가 정상군보다 유의적으로 증가하여, 인지기능손상이 유도되었음을 판단할 수 있다.

참고문헌 1. Nitta A, Itoh A, Hasegawa T, Nabeshima T. beta-Amyloid protein-induced Alzheimer`s disease animal model. Neurosci Lett. 28;170(1):63-6, 1994
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