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인지능력개선
동물실험법
제목 | 아세틸콜린 함량 측정 | ||
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구분 | 인지능력향상 | 링크 | 신경전달물질 및 시냅스 가소성 |
실험배경 | 아세틸콜린(acetylcholine)은 choline acyltransferase에 의해 뇌 신경세포에서 합성되고 시냅스 간극으로 방출되어, 신경세포 사이의 자극을 전달하는 흥분성 신경전달물질이다. 뇌 내에 아세틸콜린 부족은 인지능력 저하의 원인이 될 수 있으므로, 기능성 소재의 효능을 확인하기 위한 바이오마커로 활용할 수 있다. |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. 실험에 필요한 시약 및 시험물질을 조제한다. 2. 뇌 조직을 균질화 한다. 3. 96 well plate에 assay buffer 46 μl, choline probe 2 μl, acetylcholinesterase 2 μl, enzyme mix 2 ul를 넣고 혼합한다. 4. 30분간 실온에서 반응시킨다. 5. 570 nm에서 흡광도를 측정한다. |
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결과해석 | 후보소재에 의한 아세틸콜린 농도 증가는 인지능력개선에 영향을 미칠 수 있다. |
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참고문헌 | 1. Huang M, Kwon S, Oyamada Y, Rajagopal L, Miyauchi M, Meltzer HY. Dopamine D3 receptor antagonism contributes to blonanserin-induced cortical dopamine and acetylcholine efflux and cognitive improvement. Pharmacol Biochem Behav. 138:49-57, 2015 |
제목 | 아세틸콜린 함량 측정 | 링크 | 신경전달물질 및 시냅스 가소성 |
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실험재료 |
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실험방법 | 1. 뇌 조직을 homogenizer를 이용하여 얼음위에서 균질화시킨다. 2. 13,000 g, 4℃, 10분간 원심 분리한다. 3. 상층액을 새로운 ep tube에 옮긴 후, 실험에 사용한다. 4. Acetylcholine assay kit에서 필요한 시약을 만든다. 1) Choline assay buffer 2) Choline probe: -20℃ 보관, 녹여서 바로 사용 3) Choline enzyme mix, Acetylcholinesterase 4) Choline standard (50 mM): 10배 희석하여 사용한다. 5. 96 well plate에 시험용액을 넣는다. - Free choline: assay buffer 46 μl, choline probe 2 μl, enzyme mix 2 ul - Total choline: assay buffer 44 μl, choline probe 2 μl, enzyme mix 2 ul, acetylcholinesterase 2 μl 4. 30분간 실온에서 반응시킨다. Tips: 빛을 차단한다. 5. 570 nm에서 흡광도를 측정하고 농도를 계산한다.
*계산법: Acetylcholine (Sacetyl) = total choline (Stotal) ? free choline (Sfree) Sacetyl/Sv = C Sv = Sample volume (μL) added into the wells C = Concentration of Acetylcholine in sample Acetylcholine molecular weight: 146.2 g/mole |
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실험결과 예 |
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결과해석 | 대조군에 비해 시험물질 보충군에서 acetylcholine 함량이 증가하여 인지능력 개선 효과가 있을 것으로 판단할 수 있다. |
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참고문헌 | 1. Sakr HF, Khalil KI, Hussein AM, Zaki MS, Eid RA, Alkhateeb M. Effect of dehydroepiandrosterone (DHEA) on memory and brain derived neurotrophic factor (BDNF) in a rat model of vascular dementia. J Physiol Pharmacol. 65(1):41-53, 2014 | ||
첨부파일 |
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