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인지능력개선

동물실험법

제목 β-amyloid 함량 측정
구분 인지능력향상 링크 β-amyloid 형성 및 축적 억제
실험배경

β-amyloid는 알츠하이머 환자 뇌에서 공통적으로 관찰되는 단백질로 신경세포 바깥쪽에 비정상적으로 쌓여 덩어리를 형성한다.  β-amyloid는 아밀로이드 전구 단백질(amyloid precursor protein, APP)이 대사되는 과정에서 γ, β-secretase 효소에 의해 생성된다. β-amyloid는 신경세포에서 독성을 나타내며 신경세포사멸을 유도할 뿐만 아니라, 시냅스 손상, 염증, 산화스트레스 등을 초래하는 것으로 알려져 있다. 따라서, β-amyloid 형성에 미치는 영향을 관찰함으로써 인지능력개선 소재의 효능을 평가할 수 있다. 

실험재료
필요장비 및 소모품

ELISA reader, multipipette, pipette, pipette tip, rotary shaker

 
필요시약

β-amyloid ELISA kit

 
세포주

mouse, rat 등

 
실험방법

1. 분석시약과 뇌 조직 homogenate를 준비한다.

2. Microplate의 각 well에 시료 및 표준물질을 분주한다.  

3. β-amyloid detection antibody를 첨가한 후, 상온에서 3시간 반응시킨다.

4. Washing한다.

5. Anti-rabbit IgG HRP solution을 첨가하고, 상온에서 30분 반응시킨다. 

6. Washing한다.

7. Chromogen을 각 well에 첨가하고, 어두운 곳에서 30분간 반응시킨다. 

8. Stop solution을 첨가하여 반응을 정지시킨다.

9. 450nm에서 흡광도를 측정한다. 

결과해석

흡광도가 높아질수록 뇌 조직 내 β-amyloid 함량이 높은 것을 의미하며, 이는 인지능력개선 소재의 β-amyloid 형성 억제 효능과 관련하여 설명할 수 있다.

참고문헌 1. Nicholls RE, Sontag JM, Zhang H, Staniszewski A, Yan S, Kim CY, Yim M, Woodruff CM, Arning E, Wasek B, Yin D, Bottiglieri T, Sontag E, Kandel ER, Arancio O. PP2A methylation controls sensitivity and resistance to β-amyloid-induced cognitive and electrophysiological impairments. Proc Natl Acad Sci U S A, 113(12):3347-3352, 2016
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제목 β-amyloid 함량 측정 링크 β-amyloid 형성 및 축적 억제
실험재료
필요장비 및 소모품

ELISA reader(TECAN), multipipette(Eppendorf), pipette(Eppendorf), tip(Axygen), rotary shaker(OP-100)

 
필요시약

β-amyloid ELISA kit(Invitrogen)

 
실험방법

1. 모든 시약은 분석하기 전에 미리 상온에 꺼내둔다.

2. 실험동물의 해마 조직을 homogenization하여 시료를 준비한다.

3. β-amyloid 표준물질을 농도별로 준비한다.

Tips :

- 0, 7.81, 15.63, 31.25, 62.5, 125, 250, 500 pg/ml로 준비한다.

3. Microplate의 각 well에 희석한 시료 및 표준물질을 분주한다.

4. β-amyloid detection antibody를 각 well에 첨가한가. 

5. Plate cover를 덮은 후, 상온에서 3시간 반응시킨다.

6. Washing한다(4회 반복).

7. Anti-rabbit IgG HRP solution 100 μl씩 첨가하고, 상온에서 30분 반응시킨다.

8. Washing한다(4회 반복).

9. Chromogen을 각 well에 100 μl씩 첨가하고, 어두운 곳에서 30분간 반응시킨다. 

10. Stop solution을 100 μl씩 첨가하여 반응을 정지시킨다.

11. 450nm에서 흡광도를 측정한다. 

실험결과 예

출처: Tian T et al., 2016

결과해석

대조군에 비하여, 시험물질을 처리한 동물의 뇌 조직에서 β-amyloid 함량이 감소하였다. 

참고문헌 1. Tian T, Bai D, Li W, Huang GW, Liu H. Effects of Folic Acid on Secretases Involved in Aβ Deposition in APP/PS1 Mice. Nutrients. 8(9). pii: E556, 2016
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