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인지능력개선

동물실험법

제목 β-secretase 활성 측정
구분 인지능력향상 링크 β-amyloid 형성 및 축적 억제
실험배경

β-secretase(BACE1)는 아밀로이드 전구 단백질(amyloid precursor protein, APP)에 특이적으로 반응하는 효소로 APP 아미노산 말단을 절단하여 β-amyloid 생성에 관여하며, 최근 알츠하이머 질환 치료제로 많이 연구되고 있다. 따라서, 기능성 소재의 효능을 확인하기 위한 스크리닝 방법으로도 사용되고 있으며, 동물모델 인지능력개선 효능을 평가하기 위한 하나의 바이오마커로 활용될 수 있다.

실험재료
필요장비 및 소모품

형광분광계, black 96-microwell plates, pipette, pipette tip, multipipette

 
필요시약

β-secretase assay kit

 
세포주

mouse, rat 등

 
실험방법

1. 실험에 필요한 시약과 용매를 준비한다. 

2. Black 96-microwell plate에  reaction buffer 50 μl, BACE1 substrate 2 μl, 균질액 50 μl를 넣는다.

3. 1시간 동안 반응시킨다. 

4. Ex 335/Em 495 nm 파장으로 형광강도를 측정한다.

결과해석

시험물질에 의한 β-secretase 활성 감소는 β-amyloid 형성에 영향을 미칠 수 있을 것으로 판단된다. 

참고문헌 1. Vassar R, Bennett BD, Babu-Khan S, Kahn S, Mendiaz EA, Denis P, Teplow DB, Ross S, Amarante P, Loeloff R, Luo Y, Fisher S, Fuller J, Edenson S, Lile J, Jarosinski MA, Biere AL, Curran E, Burgess T, Louis JC, Collins F, Treanor J, Rogers G, Citron M. β-Secretase cleavage of Alzheimer`s amyloid precursor protein by the transmembrane aspartic protease BACE. Science 286:735-741, 1999
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제목 β-secretase 활성 측정 링크 β-amyloid 형성 및 축적 억제
실험재료
필요장비 및 소모품

형광분광계(TECAN), black 96-microwell plates(Falcon), pipette(eppendorf), pipette tip(QSP), multipipette(eppendorf)

 
필요시약

β-secretase assay kit(abcam)

 
실험방법

1. 마우스의 해마조직을 homogenization한다.

Tips:

- extraction buffer 50 μl 당 단백질 농도 25-250 μg이 되게 한다.

2. 실험에 필요한 시약과 용매를 준비한다. 

1) β-secretase extraction buffer

2) β-secretase 2x reaction buffer

3) β-secretase substrate 

4) β-secretase inhibitor

5) Active β-Secretase

3. Black 96-microwell plate에  reaction buffer 50 μl, BACE1 substrate 2 μl, 균질액 50 μl를 넣는다.

4. RT, 1시간 동안 반응시킨다.

Tips: 어두운 곳에서 반응시킨다.

6. Ex 335/Em 495 nm 파장으로 형광강도를 측정한다.

실험결과 예


출처: Kim TI et al., 2008

결과해석

대조군과 비교하여, 시험물질을 처리한 실험동물의 해마조직에서 β-secretase 활성이 감소하여, β-amyloid 형성에 영향을 미칠 것으로 판단된다. 

참고문헌 1. 김태일, 육동연, 박상기, 박형국, 윤여경, 홍진태. 녹차추출물/L-Tehanine 혼합물이 secretase 활성 억제 및 세포사 억제를 통한 기억력 회복능. 약학회지 52(5):384-393, 2008
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