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혈행개선

동물실험법

제목 ApoE -/- mouse 모델
구분 혈행개선 링크 동물모델
실험배경

혈액 중 지질 농도가 높아지면 혈전이 생기기 쉬운 상태가 되어 혈액의 흐름이 저해된다. ApoE -/- mouse는 혈액 중 지질 농도가 높아지도록 만들어진 모델로, 혈전 생성이 시작되는 시기가 빠르다고 알려져 있다.

실험재료
필요장비 및 소모품

사육실, Cage, 깔집, 동물용 저울, 핀셋, 가위, test tube, 시약스푼, 메스실린더, Mixer 

 
필요시약

Normal rodent chow diet

 
세포주

Spontaneously hypertensive rat 

 
실험방법

1. 실험식이를 준비한다.

1) 식이로는 rodent chow diet를 사용함.

2) 시험물질의 첨가 농도는 물질의 활성 정도에 따라 차이가 있을 수 있음.

3) 시험물질의 섭취방법은 식이에 첨가하는 것을 권장함(단, 시료의 특성상 식이형태의 섭취가 어려울 경우는 존데를 이용하여 경구투여 함).

2. 실험동물을 준비한다. 

1) 실험동물: ApoE -/- mouse

2) 군당 마리수: 10마리 내외

3) 실험목적에 따라 성별, 주령에 차이가 있음.

3. 1주일 적응기간이 이후, 몸무게를 측정하고 그룹화한다.

4. 시험물질을 첨가한 식이를 공급(또는 경구투여)한다. 

5. 일정기간동안 사육한다.

1) 체중측정: 사육기간 동안, 매주 1~2회 동일한 시간대에 측정함

2) 식이섭취량: 매 격일로 동일한 시간대(오전 권장)에 측정하여 식이효율을 산출함.

* 식이섭취량(FER, Food efficiency ratio)=체중증가량(g)/식이섭취량(g)

6. 실험 기간이 끝난 후, 혈액과 장기 시료를 채취한다.

1) 실험목적과 분석내용에 따라 채취해야 할 장기를 선택한다.

2) 혈액 및 장기 보관온도에 주의한다.

결과해석

혈행개선 기능서 소재를 공급받은 실험동물의 혈행 관련 인자들이 대조군에 비하여 유의적으로 개선되면 혈행개선 효과가 있는 것으로 판단할 수 있다.

참고문헌 1. Diaz JA, Ballard-Lipka NE, Farris DM, Hawley AE, Wrobleski SK, Myers DD, Henke PK, Lawrence DA, Wakefield TW. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis, J Vasc Surg. 2012 Mar;55(3):815-22.
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제목 ApoE -/- mouse 모델 링크 동물모델
실험재료
필요장비 및 소모품

Mixer(Kichen Aid), cage((주)정도비앤피), 물통((주)정도비앤피), 동물용체중계((주)카스), 깔집((주)정도비앤피), 핀셋(덕상종합과학), 가위(KASCO), test tube(SARSTEDT), 시약스푼(덕산종합과학), 메스실린더(덕산종합과학)

 
필요시약

Normal rodent chow diet

 
실험방법

1. 8~10주령의 수컷 apoE -/- mouse를 분양받는다. 

Tips: 

- 정상군으로 C57BL/6 mouse도 준비한다. 

2. 환경적응 후, 체중을 측정한다.

3. 환경 적응 후 실험식이와 물을 24시간동안 자유급식(ad libitum)으로 공급하고 사육한다.

Tips: 

- 사육기간은 실험조건에 따라 설정한다.

5. 실험동물 케이지는 일주일에 한 번 혹은 두 번 교환하여 청결을 유지하도록 한다.

6. 체중은 일주일에 2번 같은 시간에 측정한다.

7. 식이섭취량은 매일 같은 시각에 측정하고, 식이효율은 일주일간 측정된 체중과 같은 기간의 식이섭취량을 이용하여 계산한다.

8. 실험동물을 12시간 절식시킨 후 개체별로 체중을 측정한 뒤 마취하여 채혈한다. 혈액 샘플은 실온에 20~30분간 방치한 후, 원심분리하여 혈청을 분리하여 분석 전까지 -70℃에서 보관한다. 

9. 채혈 한 후에는 간, 신장, 췌장 및 근육 등 을 적출한다. 적출된 조직은 표면에 묻은 혈액을 0.9% 생리식염수로 씻어내고 trimming한 다음, 여지로 수분을 제거한 후 중량을 측정하여 액체질소로 급속 동결하여 분석 전까지 -70℃에서 보관한다.

실험결과 예


출처: Diaz JA et al., 2012

결과해석

ApoE-/- mouse에서는 음성대조군인 C57BL/6에서보다 혈전의 무게가 증가되어 있음을 확인할 수 있다. 즉, 혈액의 흐름이 악화되는 것이다. 여기서 다시 혈전의 무게를 감소시키는 효능이 있는 후보 소재는 혈행 개선 기능성이 있다고 볼 수 있다.

참고문헌 1. Diaz JA, Ballard-Lipka NE, Farris DM, Hawley AE, Wrobleski SK, Myers DD, Henke PK, Lawrence DA, Wakefield TW. Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis, J Vasc Surg. 2012 Mar;55(3):815-22.
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