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기능/지표 성분기능/지표 성분 입니다

기능/지표 성분 분석법

기능/지표 성분 분석법 상세페이지
구분 비타민 성분명 비타민 C(제1법)
개요 본 시험법은 시료 중 존재하는 비타민 C를 준비된 배지에 가한 후 균을 접종하여 배양 후 탁도법에 의한 증식도를 측정한 후, 공시험을 투과도 100%로 하여 분광광도기에서 510~540 nm의 파장으로 흡광도를 구하여 탁도 측정에 의해 정량한다.
장비 및 재료
[ 실험실 장비 및 소모품 ]
항온기
건조기
멸균기
무균대
시험관
피펫
원심분리기
데시케이터
메스플라스크
   
[ 분석장비 ]
분광광도계
표준물질 및
일반시약
[ 표준물질 ]
1. L-Ascorbic acid
- L-Threoascorbic acid
- 분자식 : C6H8O6, 분자량 : 176.12, CAS No. : 50-81-7
 
    
[ 일반시약 ]
1. 초산(acetic acidl)
2. 디니트로페닐하이드라진용액(DNP)
3. 증류수(Distilled water)
4. 황산용액(Sulfuric acid)
방법
[ 시액 및 표준용액의 조제 ]
1. 메타인산-초산용액
1.1. 메타인산 15 g을 초산 40 mL 및 물 200 mL로 잘 진탕 혼합하여 녹여서 물을 가해 250 mL로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관하면 1주간 사용할 수 있다.
2. 묽은 메타인산-초산용액
2.1. 타인산-초산용액을 같은 양의 물로 혼합한다.(사용 시 조제)
3. 20% 메타인산용액
3.1. 냉장고에 보존한다.
4. 10% 메타인산용액
4.1. 냉장고에 저장, 2주간 사용할 수 있다.
5. 5% 메타인산용액
5.1. 사용할 때 조제한다.
6. 인도페놀용액
6.1. 2.6-디클로로페놀 인도페놀나트륨염 0.2 g을 더운물에 녹여 100 mL로 한다. 필요하면 여과한다. 본 용액은 냉장고에 보존하고 2주간 사용할 수 있다.
7. 메타인산-티오요소용액
7.1. 10% 메타인산용액 50 mL에 티오요소 2 g을 녹인다. 물을 가해 100 mL로 한다(사용 시 조제).
8. 디니트로페닐하이드라진용액
8.1. 2,4-디니트로페닐하이드라진 2 g을 9 N 황산액 100 mL에 녹인다. 유리여과기로 여과한다. 본 용액은 냉장고에 보존하면 2주간 사용할 수 있다.
9. 비타민 C 표준용액
9.1. 비타민 C 표준물질 100 mg을 정밀히 단다.
9.2. 메스플라스크에 넣어 5% 메타인산용액에 녹여서 100 mL로 한다.
9.3. 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 및 2.5 mL를 각각 메스플라스크에 취해 5% 메타인산용액을 가해서 100 mL로 한다(사용 시 조제).
 
[ 실험용액의 제조 ]
1. 시료의 일정량을 정밀히 단 후 정확히 같은 양의 메타인산-초산용액을 잘 혼합해서 균등한 죽 상태로 한다.
2. 환원형 비타민 C로서 1~5 mg 함유되도록 균등한 죽상태의 일정량(W g)을 100 mL의 메스플라스크에 옮기고 묽은 메타인산-초산용액으로 100 mL로 한다.
3. 용액을 여과하여 처음의 수 mL를 제거해서 그 후의 여액을 취하거나 또는 원심분리해서 상등액을 취하여 시험용액으로 한다. 다만, 조작은 모두 신속히 행한다.
   
[ 시험용액 제조 ]
1. 일정량의 시료를 플라스크에 넣고, 여기에 적어도 시료의 10배량의 물을 가한다. 이 때 이 액 1 mL는 엽산 1 mg 이상을 포함하여야 한다.
2. 약 10% 암모니아수를 100 mL당 2 mL의 비로 가해서 잘 섞고, 가압멸균기에 넣어 121℃에서 약 15분간 가열한 후 식힌다.
3. 물을 가해 일정량으로 하여 여과 또는 원심분리하여 투명한 용액으로 만든다.
4. pH를 6.8로 조정한 후, 물을 가하여 적당히 희석한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액 1 mL는 엽산 약 2 μg을 포함하도록 조제한다.
결과분석 및
계산
[ 시액 및 표준용액의 조제 ]
1. 메타인산-초산용액
1.1. 메타인산 15 g을 초산 40 mL 및 물 200 mL로 잘 진탕 혼합하여 녹여서 물을 가해 250 mL로 한다. 이 용액은 냉장고에 보관하면 1주간 사용할 수 있다.
2. 묽은 메타인산-초산용액
2.1. 타인산-초산용액을 같은 양의 물로 혼합한다.(사용 시 조제)
3. 20% 메타인산용액
3.1. 냉장고에 보존한다.
4. 10% 메타인산용액
4.1. 냉장고에 저장, 2주간 사용할 수 있다.
5. 5% 메타인산용액
5.1. 사용할 때 조제한다.
6. 인도페놀용액
6.1. 2.6-디클로로페놀 인도페놀나트륨염 0.2 g을 더운물에 녹여 100 mL로 한다. 필요하면 여과한다. 본 용액은 냉장고에 보존하고 2주간 사용할 수 있다.
7. 메타인산-티오요소용액
7.1. 10% 메타인산용액 50 mL에 티오요소 2 g을 녹인다. 물을 가해 100 mL로 한다(사용 시 조제).
8. 디니트로페닐하이드라진용액
8.1. 2,4-디니트로페닐하이드라진 2 g을 9 N 황산액 100 mL에 녹인다. 유리여과기로 여과한다. 본 용액은 냉장고에 보존하면 2주간 사용할 수 있다.
9. 비타민 C 표준용액
9.1. 비타민 C 표준물질 100 mg을 정밀히 단다.
9.2. 메스플라스크에 넣어 5% 메타인산용액에 녹여서 100 mL로 한다.
9.3. 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 및 2.5 mL를 각각 메스플라스크에 취해 5% 메타인산용액을 가해서 100 mL로 한다(사용 시 조제).
 
[ 실험용액의 제조 ]
1. 시료의 일정량을 정밀히 단 후 정확히 같은 양의 메타인산-초산용액을 잘 혼합해서 균등한 죽 상태로 한다.
2. 환원형 비타민 C로서 1~5 mg 함유되도록 균등한 죽상태의 일정량(W g)을 100 mL의 메스플라스크에 옮기고 묽은 메타인산-초산용액으로 100 mL로 한다.
3. 용액을 여과하여 처음의 수 mL를 제거해서 그 후의 여액을 취하거나 또는 원심분리해서 상등액을 취하여 시험용액으로 한다. 다만, 조작은 모두 신속히 행한다.
   
[ 시험용액 제조 ]
1. 일정량의 시료를 플라스크에 넣고, 여기에 적어도 시료의 10배량의 물을 가한다. 이 때 이 액 1 mL는 엽산 1 mg 이상을 포함하여야 한다.
2. 약 10% 암모니아수를 100 mL당 2 mL의 비로 가해서 잘 섞고, 가압멸균기에 넣어 121℃에서 약 15분간 가열한 후 식힌다.
3. 물을 가해 일정량으로 하여 여과 또는 원심분리하여 투명한 용액으로 만든다.
4. pH를 6.8로 조정한 후, 물을 가하여 적당히 희석한 것을 시험용액으로 한다. 시험용액 1 mL는 엽산 약 2 μg을 포함하도록 조제한다.
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