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기능/지표 성분기능/지표 성분 입니다

기능/지표 성분 분석법

기능/지표 성분 분석법 상세페이지
구분 아미노산 및 단백질류 성분명 L_카르니틴
개요 본 시험법은 시료 중 L-카르니틴을 증류수에 녹여 초음파 추출하고 Sep-pak카트리지로 처리한 것을 옥타데실실릴화한 칼럼을 통하여 L-카르니틴을 분리하는 방법으로 자외부흡광광도검출기를 이용하여 L-카르니틴의 최대 흡수 파장인 227nm에서 검출하여 정량한다.
장비 및 재료
[ 실험실 장비 및 소모품 ]
용매용 일회용 실린지
여과용 멤브레인 필터 및 디스크형 멤브레인 필터
HPLC용 유리병
부피플라스크(100mL, 50mL)
뷰흐너 깔대기(Buchner funnel)
초음파진탕기(Sonicator)
여과지(Filter paper)
Sep-pak C18 카트리지
       
[ 분석장비 ]
고속액체크로마토그래프
자외부흡광광도검출기
칼럼오븐
Capcellpak C18(4.6mm i.d. x 250mm, octadecyl silica) 또는 이와 동등한 것
  
[ 분석장비의 준비 ]   
이동상은 아세토니트릴과 0.4% heptafluorobutyric acid 를 10 : 90의 비율로 혼합하여 분당 1mL씩 흘려 기기와 칼럼을 안정화 시킨다.
표준물질 및
일반시약
[ 표준물질 ]
1. L_카르니틴(L-carnitine) ;
- (−)-(R)-3-Hydroxy-4-(trimethylammonio)butyrate Vitamin B
- 분자식 : (CH3)3N+CH2CH(OH)CH2COO-, 분자량 : 161.20, CAS No. : 541-15-1

     
[ 일반시약 ]
1. 메탄올(Methanol, HPLC grade)
2. 아세토니트릴(Acetonitrile, HPLC grade)
3. 증류수(Distiled water)
4. 헵타플루오로뷰티린산(heptafluorobutyric acid, Extra grade)
방법
[ 표준용액 제조 ]
(단, 시험용액 중 분석하고자 하는 농도가 검량선 내에 포함될 수 있도록 표준용액의 농도를 적절히 조절하여 사용한다.)
1. L-카르니틴 표준물질 1.2g을 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 표준물질을 100mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 증류수를 표선까지 넣는다.
4. [2]용액을 증류수를 이용하여 6.0, 3.0, 1.5mg/mL로 희석한다.
 
[ 시험용액 제조 ]
1. 시료 약 0.5~1.0g을 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 시료를 50mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 여기에 약 30mL의 증류수를 넣어 초음파로 30분간 진탕한다.
4. 증류수를 이용하여 표선까지 넣은 후 여과지(여과가 잘 되지 않을 경우 뷰흐너깔대기(Buchner funnel)와 감압펌프를 이용하여 여과한다.)로 거른다.
5. 미리 활성화시킨(메탄올 10mL, 증류수 10mL) Sep-pak C18카트리지에2mL/분의 속도로 처리한다.
6. [5]에서 처리한 액을 0.45μm 멤브레인 필터로 여과한다.
결과분석 및
계산
[ 계산 ]
- L-카르니틴 함량(mg/g) = A x (B/C) x D x (1/100) x (1/1000)
A : 시험용액 중 L-카르니틴의 농도(ug/mL)
B : 시험용액 전량(mL)
C : 시료 채취량(g)
D : 표준품 순도(%)
참고문헌 1. -, United States Pharmacopoeial Convention, Unite States Pharmacopoeia, 23rd, -(-) p877, 1994
2. Lv YF, Hu X, Bi KS, Determination of mildronate in human plasma and urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry, J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci., 852(1-2) p35-39, 2007
3. Kakou A, Megoulas NC, Koupparis MA, Determination of L-carnitine in food supplement formulations using ion-pair chromatography with indirect conductimetric deyection, J Chromatogr A., 1069(2) p209-215, 2005
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