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기능/지표 성분기능/지표 성분 입니다

기능/지표 성분 분석법

기능/지표 성분 분석법 상세페이지
구분 당 및 탄수화물류 성분명 N-아세틸글루코사민
개요 본 시험법은 시료 중 존재하는 N-아세틸글루코사민을 아세토니트릴용액으로 N-아세틸글루코사민을 추출하여 Shodex NH2P-50칼럼을 통해 N-아세틸글루코사민을 분리하는 방법으로 시차굴절계(RI)를 이용하여 검출하여 정량한다.
장비 및 재료
[ 실험실 장비 및 소모품 ]
용매용 일회용 실린지
여과용 멤브레인 필터 및 디스크형 멤브레인 필터
부피플라스크(100mL)
HPLC용 유리병
        
[ 분석장비 ]
고속액체크로마토그래프
시차굴절계(RI)
칼럼오븐
Shodex NH2P-50(4.6mm I.d. × 250mm, polyamine bonded polymer gel)또는 이와 동등한 것
   
[ 분석장비의 준비 ]
이동상은 증류수와 아세토니트릴을 25 : 75(v : v)로 조제하여 분당 0.8mL씩 충분한 시간동안 흘려 기기와 칼럼을 안정화 시킨다.
표준물질 및
일반시약
[ 표준물질 ]
1. N-아세틸글루코사민(N-Acetylglucosamine) ;
- 2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose
- 분자식 : C8H15NO6, 분자량 : 221.21, CAS No. : 7512-17-6
  
         
[ 일반시약 ]
아세토니트릴(Acetonitrile, HPLC grade)
증류수(Distiled water)
방법
* 제1법
[ 표준용액 제조 ]
1. N-아세틸글루코사민 표준물질 0.2g을 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 표준물질을 100mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 증류수 50mL을 가하여 녹인다.
4. 아세토니트릴을 이용하여 표선까지 맞춘다.
5. 이를 0.45μm의 멤브레인 필터로 여과한 것을 표준용액으로 한다.
      
[ 시험용액 제조 ]
1. 시료 약 0.2g 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 시료를 100mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 증류수 50mL을 가하여 녹인다.
4. 아세토니트릴을 이용하여 표선까지 맞춘다.
5. 이를 0.45μm의 멤브레인 필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.
 
* 제2법
[ 표준용액 제조 ]
(단, 시험용액 중 분석하고자 하는 농도가 검량선 내에 포함될 수 있도록 표준용액의 농도를 적절히 조절하여 사용한다.)
1. N-아세틸글루코사민 표준물질 500mg을 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 표준물질을 100mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 증류수 50mL을 가하여 녹인다.
4. 아세토니트릴을 이용하여 표선까지 맞춘다.
5. 이를 아세토니트릴로 적절히 희석하여 6가지 다른 농도(500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 μg/mL)의 표준용액으로 준비한 후 0.45μm 멤브레인 필터로 여과하여 사용한다.
      
[ 시험용액 제조 ]
1. 시료 약 200mg 정밀히 측정한다.
2. 정밀히 측정한 시료를 100mL 부피플라스크에 넣는다.
3. 증류수 50mL을 가하여 녹인다.
4. 아세토니트릴을 이용하여 표선까지 맞춘다.
5. 이를 0.45μm의 멤브레인 필터로 여과한 것을 시험용액으로 한다.
결과분석 및
계산
[ 기기 분석  ]
다음 표 1의 조건으로 사용하되 적용되는 기기에 따라 수정이 필요할 수 있다.
표 1. 고속액체크로마토그래프 조건(예)
 
[ 계산 ]
* 1법
- N-아세틸글루코사민 함량(%) = (B/A) × C
A : 표준용액의 Area 값
B : 시험용액의 Area 값
C : 표준품의 순도(%)
 
* 2법
- N-아세틸글루코사민 함량(%) = A × (B / C) × E / 100 / 1000
A : 시험용액 중 N-아세틸글루코사민의 농도(ug/mL)
B : 시험용액의 전량(mL)
C : 시료 채취량(g)
E : 표준품의 순도(%)
참고문헌 1. Punin Crespo MO, Vilasoa Martinez M, Lopez Hernandez J, Lage Yusty MA, High-performance liquid chromatographic determination of chitine in the snow crab, chionoecetes opilio., Journal of chromatography A, 1116() p189-192, 2006
2. Acharya B. VISHUKUMAR, Mandyam C. VARADARAJ, Lalitha R. GOWDA and Rudrapatnam N, THERANATHAN, Characterization of Chito-oligosaccharides prepared by chitosanolysis with the aid of papain and Pronase, and their bacterial action against Bacillus cereus and Escherichia coli., Biochem. J, 391() p167-175, 2005
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